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技術分享:ELISA加樣步驟的常見問題及對應方法

更新時間:2021-02-02   點擊次數:1279次

        ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導致顯色不全、花板等結果。選擇試劑時,應選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

ELISA加樣步驟的常見問題:
    ①:過長(特別是室內溫度較高時);
    ②:手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間;
    ③:加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標本分離不好即進行加樣。

 

對應解決方法:
    ①:標本為血清,將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。
    ②:加樣后及時放入孵箱。
    ③:加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
    ④:如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
    ⑤:標本較多時,請分批操作。
               
        ELISA試劑盒在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。




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