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恒遠技術人員為您講解ELISA實驗重點

更新時間:2021-02-03   點擊次數:1348次

  ELISA試劑盒實驗是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。看似簡單的Elisa試劑盒操作實驗中,有著一些關鍵重點需要大家了解及掌握。在今天的文章內容,上海恒遠生物的技術人員為您講解實驗重點:

 
一、檢測試劑要適量
  切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優化一下何時應加入終止液。如果您的ELISA試劑盒不幸地遇到了高背景,那么也無需太擔心,依次查看ELISA系統中的組分,并排除可能存在的問題。悉心優化,相信很快就會有漂亮的結果。
 
二、洗滌很重要
  如果未結合的材料殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。有必要的話,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。
 
三、關鍵的封閉
  封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。
 
  如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。
 
  常用的非離子型去污劑是Tween-20(上海恒遠生物公司的Tween-20 吐溫-20 新貨已經上市啦,需要的咨詢哦!)。這種封閉液便宜、穩定,在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用,因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度,它會降低特異結合,產生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協助洗滌過程中的封閉。
  
 
四、抗體濃度須優化
  如果試劑稍有不同,則可能需要優化抗體的量。非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。
 
  以上內容就是恒遠技術人員為您總結的ELISA試劑盒實驗的重點,希望能夠給您的實驗帶來幫助。如有疑問,歡迎廣大用戶咨詢,我們將本著 “專注品質、信守承諾、積極溝通、創新服務”的精神,熱誠為每一位客戶提供優質的服務!




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