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免疫組化中抗體選擇要求

更新時間:2024-04-26   點擊次數(shù):899次

1、一抗選擇


(1)選擇單克隆還是多克隆抗體。


       由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合,就像導-彈精確地命中目標一樣。另一方面,即使是同一個抗原決定簇,在機體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體,形成好幾種單克隆抗體混雜物,稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中,一般單克隆抗體特異性強,但親和力相對較小,檢測抗原靈敏度相對較低,而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強,靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過封閉等避免)。


(2)種屬來源。


       家兔來源的抗體多是多克隆,而小鼠來源的抗體多是單克隆,但也有例外。根據(jù)此來源選擇相應的二抗。


(3)種屬反應性的選擇。


       這一點很重要,表明這種抗體可能存在種屬差異,且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內(nèi)的抗原。


(4)能否做免疫組化。


       一抗說明書都會注明做WB、IHC、ICC、IF等,建議選擇注明的抗體(經(jīng)過文章證明)。


(5)檢測標本類型。


      用于檢測石蠟切片還是冰凍切片,一般能做石蠟切片的抗體,都可用來檢測冰凍切片,但能做冰凍切片的抗體,不一定能檢測石蠟切片中的抗原。


2、二抗選擇


(1)種屬來源。


       主要根據(jù)一抗種屬來源來決定購買二抗來源,如一抗是小鼠來源,那二抗就買抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。


(2)標記物的選擇。


       有HRP、Biotin、熒光素等標記物,一般SP三步法二抗選擇Biotin標記為二抗,與后面的SP結合反應;而免疫熒光染色就需要購買不同熒光素標記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。(這主要與后面有無三抗和三抗種類有關)。


(3)選擇IgM還是IgG。


      一抗是IgM,二抗就選擇IgM;反之,一抗是IgG,則二抗選擇IgG。

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