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ELISA試劑盒樣本處理方法

更新時間:2025-02-28   點擊次數:260次

?一、核心處理流程?

?1. 樣本類型與預處理?

?樣本類型

?處理方法(步驟)

?關鍵注意事項

?血清

全血靜置30分鐘(室溫),離心2000×g 10分鐘(4℃),取上清

避免溶血;避免反復凍融(最多3次)

?血漿?

抗凝全血(EDTA/肝素)離心3000×g 15分鐘(4℃),取上層血漿

抗凝劑需與試劑盒兼容(詳見說明書)

?細胞上清

直接離心1000×g 5分鐘去除細胞碎片,上清分裝保存

避免細胞裂解污染(可能干擾檢測)

?組織勻漿

組織剪碎后液氮研磨,按比例加入PBS(含蛋白酶抑制劑)勻漿,離心12000×g 20分鐘取上清

控制總蛋白濃度(建議1-10 mg/mL

?尿液/唾液

離心2000×g 10分鐘去除沉淀,上清加入0.1% BSA穩定

檢測前需稀釋(避免高鹽/酸堿干擾)

?

2. 保存與運輸?

l短期保存?:4℃冷藏(≤24小時),避免微生物滋生。

l長期保存?:-80℃分裝凍存(避免反復凍融),使用凍存管標注批次/日期。

l運輸?:干冰(-80℃)或冷鏈箱(2-8℃),避免劇烈震蕩。

 

?二、質量控制要點?

1.?樣本稀釋?

l按試劑盒要求梯度稀釋(常用稀釋液:PBS+1% BSA)。

l避免基質效應?:高脂血/溶血樣本需超速離心或過濾。

 

2.?干擾物處理?

l去除內源性酶?:過氧化氫酶(HRP系統)或堿性磷酸酶(AP系統)抑制劑。

l去除類風濕因子?:添加IgG阻斷劑(針對血液樣本)。

3.?質控樣本?

l陽性/陰性對照?:每板至少設置2孔。

l?標準曲線?:覆蓋檢測范圍(建議R2≥0.99)。


三、常見問題與解決方案

?問題

?可能原因

?解決方案

?OD值異常高/

樣本過度稀釋/未稀釋

預實驗優化稀釋比例,檢查標準曲線

 

?板內重復性差

離心不徹-底或氣泡干擾

離心后靜置5分鐘,加樣時避免產生氣泡

 

?非特異性顯色

交叉反應或封閉不充分

增加封閉時間(1小時),使用專用封閉劑

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提示?:不同品牌試劑盒可能存在差異,務必以說明書為準!


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