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elisa標(biāo)本采集,ELISA試劑盒操作流程

更新時(shí)間:2012-09-03   點(diǎn)擊次數(shù):1909次

 elisa試劑盒標(biāo)本采集和保存

◎可用作 ELISA的標(biāo)本十分廣泛,體液(如血清,血漿,各種積液),分泌物(如唾液)和排瀉物(如糞便,尿液)均可作為標(biāo)本以測(cè)定其中 的抗原或抗體成分,一般使用血清。
n 標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)盡量避免溶血,因紅細(xì)胞破裂可釋放過(guò)氧化物酶活性物質(zhì)干擾立可讀方法的結(jié)果,可造成假陽(yáng)性;長(zhǎng)菌的標(biāo)本同樣的道理易 產(chǎn)生假陽(yáng)性。
◎抗凝不*的標(biāo)本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽(yáng)性,建議盡量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。
◎標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易導(dǎo)致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深,一般血清置4℃冰箱5天內(nèi)完成測(cè)試。如需保存一周以 上則要-20℃冰凍保存,融解時(shí)應(yīng)上下顛倒充分混勻,同時(shí)避免氣泡。
◎ELISA的靈敏度>1ng/ml水平上,標(biāo)本間的污染要盡量避免,尤其不應(yīng)與生化試驗(yàn)用同一管標(biāo)本.zui起碼應(yīng)先做免疫 后做生化.
附:內(nèi)外干擾物質(zhì)的影響分析
溶血 脂濁 RF 自身抗體 AFP 補(bǔ)體 & nbsp; 肝素 ; EDTA
A 0.165 0.200& nbsp; 0.250 &n bsp; 0.264 &nb sp; 0.186 0.146 0.183 0.126
S 0.023 0.016& nbsp; 0.007 &n bsp; 0.029 &nb sp; 0. 010 0. 007 0.019 &nbs p; 0.013
A對(duì)照0.151 0.195 ;0.195 0.195 & nbsp; 0 .116 0.116 0.116 0.116
S 0.038 0.008& nbsp; 0. 008 0.008 &nbs p; 0.018 0.018 &n bsp; 0.018 0.018
P > 0.05 > 0.05 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 <0.01 <0.01

 ELISA試劑盒操作流程:
1. 根據(jù)需要,將若干孔德條帶放置在支架上;

2. 將標(biāo)本、陰性質(zhì)控、陽(yáng)性質(zhì)控以及標(biāo)準(zhǔn)品作 1:200 稀釋(將5μl樣品加稀 釋液稀釋到 1ml,混勻) ;

3. 取 100μl 已稀釋的血清樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和陰性質(zhì)控、陽(yáng)性質(zhì)控加入相應(yīng)得孔板 內(nèi)(質(zhì)控和標(biāo)準(zhǔn)品至少需做兩孔) ,A1 孔不加液體作為空白底色;

4. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘;

5. 到時(shí)間后將孔被液體甩去,并用 1X 洗滌液反復(fù)清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗 一次;

6. 在每孔內(nèi)加 100μl 酶結(jié)合物(需按比例稀釋,除 A1 孔外) ,輕微混勻;

7. 在 37℃溫箱中放置 30 分鐘;

8. 甩去孔內(nèi)酶結(jié)合物,用 1X 洗滌液反復(fù)清洗 4 次,zui后用蒸餾水洗一次; (包括 A1 孔也加) ,輕微

9. 在每孔內(nèi)加 100μlTMB(使用前混合A液和B液) 混勻;

10. 37℃放置 15 分鐘; ,輕微混勻;

11. 每孔加 50μl 1N 硫酸終止液(包括 A1 孔)

12. 在 15 分鐘內(nèi),用酶標(biāo)儀在 450nm 處讀取吸光度值(OD 值) (將酶標(biāo)儀 A1 孔設(shè)定為空白孔) 。

  上海恒遠(yuǎn)ELISA試劑盒供應(yīng)商是一家生物技術(shù)企業(yè),公司集經(jīng)銷(xiāo)批發(fā) ELISA試劑盒,人ELISA試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒為一體的有限責(zé)任公司,是一家經(jīng)國(guó)家相關(guān)部門(mén)批準(zhǔn)注冊(cè)的企業(yè)。 ELISA試劑盒,生物試劑,進(jìn)口培養(yǎng)基,胎牛血清,抗體等產(chǎn)品已國(guó)內(nèi)大部分地區(qū) ,銷(xiāo)售額逐年穩(wěn)步上升。

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