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恒遠(yuǎn)福利!十月總結(jié)ELISA工作手冊公布

更新時間:2014-10-29   點擊次數(shù):1951次

    距離十月終結(jié)日期沒剩下幾天了,我公司開展了一個ELISA總結(jié)討論會。今天將結(jié)果分享給大家,上海恒遠(yuǎn)生物福利來了!十月總結(jié)ELISA工作手冊公布:
·根據(jù)實驗設(shè)計,選擇和訂購合適的ELISA試劑盒。
·根據(jù)實驗?zāi)康脑O(shè)計合理的樣品實驗排板,預(yù)留標(biāo)準(zhǔn)品,(+)和(-)對照,空白對照位置,樣品位置,所有對照樣品和待測樣品均需要實驗復(fù)孔。
·實驗前確認(rèn)ELISA平臺穩(wěn)定,儀器設(shè)備正常工作,試劑耗材足夠?qū)嶒炐枰?br />    

ELISA板包被實驗操作流程
    1.碳酸鹽包被緩沖液:50mM碳酸緩沖液,pH 9.6,4℃保存。稱取Na2CO3 0.15 克,NaHCO3 0.293克,蒸餾水溶解,定容至100 ml。
    2.包被抗原:
·用50mM的碳酸鹽包被緩沖液(pH 9.6)溶解抗原,稀釋抗原濃度為10-20μg/ml,96孔酶標(biāo)板每孔加入100μl,4℃放置一個晚上。
·第二天棄去包被液后,PBST洗滌3次,直接后續(xù)實驗或者冰箱保存。
·包被細(xì)胞
  ① 在96孔培養(yǎng)板上接種細(xì)胞,2E4 cells/well,37℃放置一個晚上培養(yǎng)。
  ② 第二天用PBS洗滌培養(yǎng)板2-3次。
  ③ 每孔加入125μl 10% Formalin(1:10稀釋),室溫下固定15 min。
  ④ 用滅菌水洗滌培養(yǎng)板3次,晾干后儲藏在2- 8℃?zhèn)溆谩?nbsp;
結(jié)果的判定
    嚴(yán)格依據(jù)試劑盒提供的陽性判定值(CO)進(jìn)行結(jié)果判定。廠商提供試劑的同時,說明書上列出的CO值是建立在一系列科學(xué)試驗及統(tǒng)計研究的基礎(chǔ)上,不應(yīng)隨意更改。定量測定需要制備標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算結(jié)果。 
    
室間質(zhì)量評價(EQA)
    EQA是一種回顧性評價,主要是控制實驗室結(jié)果的準(zhǔn)確性。其要點是保證同一患者的標(biāo)本一樣對待室間質(zhì)評物,必須強(qiáng)調(diào)的是EQA結(jié)果必須同IQC一并分析,找出原因,改進(jìn)工作中的不足,同時指導(dǎo)實驗室選擇合適的試劑盒。
    綜上所有內(nèi)容,我公司技術(shù)人員說:ELISA檢測操作步驟復(fù)雜,可能會影響測定結(jié)果的因素較多,分布在測定操作的各個步驟中,因此必須加強(qiáng)各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。

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