人妻有码中文字幕-国产视频一区二区-99热在线观看-在厨房拨开内裤进入毛片

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 如何降低ELISA實驗的背景,恒遠教你方法

如何降低ELISA實驗的背景,恒遠教你方法

更新時間:2015-09-06   點擊次數:1120次

   ELISA實驗的原理似乎很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個實驗。在實驗結束時,我們是否能獲得有意義的信息,ELISA試劑盒這在很大程度上取決于結果的信噪比。ELISA試劑盒背景噪音會影響您對結果的判斷。如何降低ELISA的背景,恒遠教你方法。

洗滌很重要

  洗滌步驟看似很無聊,其實很重要,因為如果未結合的材料(如非特異結合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會阻止非特異結合反應。如果背景過高,而您懷疑洗滌不夠時,可以嘗試增加洗滌次數。

封閉更關鍵

  封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。如果您的背景過高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當延長封閉時間。

如果您一直被背景問題所困擾,那么也許您該花些時間來優化封閉液。這可能需要時間,但也是值得的。目前主要有兩種類型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類型須取決于多個因素,包括微孔板的表面試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合,但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。

  ELISA實驗zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩定,在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。但它們只在存在時起作用,ELISA試劑盒因為很容易被洗掉。因此所有洗滌液中也必須添加封閉液。請勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會降低特異結合,產生假陰性。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協助洗滌過程中的封閉。

  蛋白封閉液則有所不同,是*的。它們與開放位點結合并封閉,同時穩定與微孔板結合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截許多不同類型的分子相互作用。不過,它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個問題的一種方法是使用雞或魚的正常血清。

抗體濃度須優化

  ELISA實驗我們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟,ELISA試劑盒但是如果試劑稍有不同,則可能需要優化抗體的量。記住,非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點,切勿使用過多的一抗或二抗。

檢測試劑要適量

  另一點也很顯而易見:切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高,或者未正確稀釋,則會導致高背景。也不要顯色過度,如有必要,優化一下何時應加入終止液。




主站蜘蛛池模板: 国内少妇偷人精品视频免费| 久久久综合香蕉尹人综合网| 亚洲av无码成人网站久久精品大 | 久久青青草原亚洲av无码麻豆| 五十丰满熟妇性旺盛| 美女张开腿黄网站免费| 久久精品国产只有精品66| 国产麻豆精品精东影业av网站| 一本无码人妻在中文字幕免费| 无码人妻精品一区二区在线视频| 日韩av午夜在线观看| 国产无套粉嫩白浆在线| 国产av无码精品色午夜| 天堂中文最新版在线中文| 女性高爱潮视频| 处破痛哭a√18成年片免费| 狠狠躁夜夜躁人人爽天天天天| 免费无码一区二区三区蜜桃| 久久久久亚洲av无码尤物| 丁香花在线影院观看在线播放| 免费大黄网站| 午夜精品久久久久久久99热| 国产情侣疯狂作爱系列| 无码少妇一区二区| 成人精品视频一区二区三区| 蜜芽亚洲av无码一区二区三区| 亚洲国产精品综合久久网各| 女人脱了内裤趴开腿让男生摸 | 中文幕无线码中文字蜜桃| 第一亚洲中文久久精品无码| 久久久www成人免费精品| 男人的天堂av社区在线| 国产性生交xxxxx无码| 欧美颜射内射中出口爆在线| 国产丝袜无码一区二区三区视频| 免费无码又爽又黄又刺激网站 | 国产98在线 | 免费、| 中文字幕在线亚洲精品| 亚洲国产欧美日韩精品一区二区三区 | 午夜dv内射一区区| 中文精品一卡2卡3卡4卡葡京|