人妻有码中文字幕-国产视频一区二区-99热在线观看-在厨房拨开内裤进入毛片

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 如何降低ELISA實(shí)驗(yàn)的背景,恒遠(yuǎn)教你方法

如何降低ELISA實(shí)驗(yàn)的背景,恒遠(yuǎn)教你方法

更新時(shí)間:2015-09-06   點(diǎn)擊次數(shù):1160次

   ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。然而,即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉,如果做得不太好,也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),我們是否能獲得有意義的信息,ELISA試劑盒這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。ELISA試劑盒背景噪音會(huì)影響您對(duì)結(jié)果的判斷。如何降低ELISA的背景,恒遠(yuǎn)教你方法。

洗滌很重要

  洗滌步驟看似很無(wú)聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高,而您懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

封閉更關(guān)鍵

  封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過(guò)高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。

如果您一直被背景問(wèn)題所困擾,那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封閉液。這可能需要時(shí)間,但也是值得的。目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液:蛋白和非離子型去污劑。您使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素,包括微孔板的表面試劑、ELISA試劑盒吸附的抗原、您的抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合,但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。

  ELISA實(shí)驗(yàn)zui常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液便宜、穩(wěn)定,在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。但它們只在存在時(shí)起作用,ELISA試劑盒因?yàn)楹苋菀妆幌吹簟R虼怂邢礈煲褐幸脖仨毺砑臃忾]液。請(qǐng)勿使用高濃度(正常濃度為0.01-0.1%),它會(huì)降低特異結(jié)合,產(chǎn)生假陰性。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封閉液,后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封閉。

  蛋白封閉液則有所不同,是*的。它們與開(kāi)放位點(diǎn)結(jié)合并封閉,同時(shí)穩(wěn)定與微孔板結(jié)合的抗原分子。常用的蛋白封閉液包括牛血清白蛋白(BSA)、脫脂奶粉、正常血清和魚(yú)明膠。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截許多不同類(lèi)型的分子相互作用。不過(guò),它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。解決這個(gè)問(wèn)題的一種方法是使用雞或魚(yú)的正常血清。

抗體濃度須優(yōu)化

  ELISA實(shí)驗(yàn)我們通常會(huì)follow師兄師姐留下來(lái)的操作步驟,ELISA試劑盒但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。

檢測(cè)試劑要適量

  另一點(diǎn)也很顯而易見(jiàn):切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高,或者未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。

聯(lián)


主站蜘蛛池模板: 亚洲国产精品一区二区成人片国内| 韩国无码av片在线观看网站| 国产色无码精品视频免费| 97久久精品无码一区二区| 51久久夜色精品国产水果派解说| 熟妇人妻无码中文字幕老熟妇| 免费国产裸体美女视频全黄| 国产极品美女高潮无套| 免费无码av片在线观看播放| 无码熟妇人妻av在线影片免费| 久久久国产精华液| 鲁一鲁一鲁一鲁一澡| 区二区欧美性插b在线视频网站 | 无码少妇一区二区浪潮av| 成人免费视频一区二区三区| 免费无码不卡视频在线观看 | 肉体裸交137日本大胆摄影| 翘臀后进少妇大白嫩屁股| 国产乱人伦偷精品视频| 凹凸精品视频分类视频| 国产亚洲人成网站在线观看琪琪秋 | 99久久99久久精品免费看蜜桃| 毛片无码国产| 国产白嫩美女在线观看| 久久久久99精品成人片试看| 97se亚洲国产综合自在线观看| 亚洲av午夜国产精品无码中文字 | 一本大道久久香蕉成人网| 亚洲综合激情五月丁香六月 | 67194熟妇人妻欧美日韩| 风间由美性色一区二区三区| 欧洲熟妇色xxxx欧美老妇软件| 内射少妇36p亚洲区| 欧美性猛交xxxx免费看| 国产亚av手机在线观看| 婷婷综合久久中文字幕| 欧美日韩久久中文字幕| 国产 国语对白 露脸| 人妻无码中文专区久久五月婷| 刺激一区仑乱| 中国浓毛少妇毛茸茸|