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恒遠實驗:勘測丙二醛的方法步驟

更新時間:2014-02-11   點擊次數:912次

恒遠實驗:勘測丙二醛的方法步驟

    丙二醛被簡稱為MDA,它是常用的膜脂過氧化指標,在酸性和高溫度條件下,可以與硫代巴比妥酸(TBA)反應紅棕色的*川,其zui大吸收波長在532nm。
    在實驗步驟之前我們要有一個相應的準備工作。首先,本次實驗的原理得要了解一下,我們接著前面的來說明一下,測定植物組織中MDA時受多種物質的干擾,其中zui主要的是可溶性糖,糖與TBA顯色反應產物的zui大吸收波長在450nm,但532nm處也有吸收。
    植物遭受干旱、高溫、低溫等逆境脅迫時可溶性糖增加,因此測定植物組織中MDA—TBA反應物質含量時一定要排除可溶性糖的干擾。低濃度的鐵離子能夠顯著增加TBA與蔗糖或MDA顯色反應物在532、450nm處的消光度值,所以在蔗糖、MDA與TBA顯色反應中需一定量的鐵離子,通常植物組織中鐵離子的含量為每克千重100—300ug·g-1,根據植物樣品量和提取液的體積,加入Fe3+的終濃度為0.5umol·L-1。
    以上為勘測丙二醛的實驗原理,終于要進入測量的方法環節了,丙二醛的提取稱取剪碎的試材1g,加入2mll0%TCA和少量石英砂,研磨至勻漿,再加8mlTCA研磨,勻漿在4000r·min-1離心10min,上清液為樣品提取液。
    顯色反應和測定 吸取離心的上清液2ml(對照加2ml蒸餾水),加入2ml 0.6%TBA溶液,混勻物于沸水浴上反應15min,迅速冷卻后再離心。取上清液測定532、600和450nm波長下的消光度。
勘測丙二醛的實驗結果:




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