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人軟骨寡聚基質蛋白

更新時間:2022-08-11

簡要描述:

上海恒遠生物長期代理美國進口分裝、原裝ELISA“人軟骨寡聚基質蛋白",現貨供應,物美價廉。中英文雙版說明書,提供免費代測服務。需要產品以及其它詳細信息請直接我司在線人員或業務人員。

型號:人COMP試劑盒96人份/48人份點擊量:950

產品名稱:人軟骨寡聚基質蛋白    
英文名稱:Human cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA KIT 
性狀:液體     
適應癥:科研     
規格:96人份/48人份     
貯藏:2-8℃     
檢測方法:ELISA酶聯免疫     
產品用途: For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務.
試劑器材
  1. 試劑
  (1) 包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
    NaCO31.59克 NaHCO3  2.93克  加蒸餾水至1000ml  
    (2) 洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4?12H2O 2.9克 NaCl  8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
  (3) 稀釋液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清與洗滌液配成5~10%使用。
  (4) 終止液(2M H2SO4):蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
  (5) 底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml 0.1M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml 加蒸餾水50ml。
  (6) TMB(四甲基聯苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml底物緩沖液(PH5.5) 10ml0.75%H2O2 32μl
  (7) ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物緩沖液(PH5.5) 1ml 3%H2O2 2μl
  (8) 抗原、抗體和酶標記抗體。
  (9) 正常人血清和陽性對照血清。
  2. 器材:
  (1) 聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標板)40孔或96孔,ELISA檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。
  (2) 小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。
  (3) 4℃冰箱,37℃孵育箱。
注意事項
  1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
  2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
  (1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
  (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
  (3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。
  (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。

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