更新時間:2022-08-21
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用于臨床檢驗的 ELISA 主要有以下幾種類型:
(一)雙抗體夾心法
1、雙抗體夾心法檢測抗原
操作步驟如下:
1)將特異性抗體與固相載體結合,形成固相抗體。洗滌除去尚未結
合的抗體及一些雜質。
2)加入待測標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
3)加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如 HBeAg、HBsAg、hCG 、AFP等。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標所使用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測。
“兔子生長激素釋放多肽試劑盒”在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象,此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結果將低于實際的含量,這種現象被為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等)時,應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
2、雙抗原夾心法檢測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗體。 此法中受檢標本不需稀釋,可直接用于測定,因此其敏感度相對高于間接法。乙肝標志物中抗 HBs 的檢測常采用本法。本法關鍵在于酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。
的優點
1、 靈敏性高
該測定法的靈敏度來自作為報告集團的酶。*, 酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應 ,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實現了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位,或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。
2、特異性強
其特異性來自抗體或抗原的選擇性。抗原抗體的結合實質上只發生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系,所以抗原抗體反應具有高度的特異性。