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鵝圓環病毒抗體(CV Ab)ELISA試劑盒-定性

更新時間:2022-10-24

簡要描述:

鵝圓環病毒抗體(CV Ab)ELISA試劑盒-定性本試劑盒用于定性測定鵝血清,血漿及相關液體樣本中圓環病毒抗體(CV Ab)。

型號:點擊量:1951

實驗原理

本試劑盒采用間接法測定標本中鵝圓環病毒抗體(CV Ab)。用純化的抗原包被微孔板,

制成固相抗原,與樣品中圓環病毒抗體(CV Ab)溫育后,加入生物素標記的抗 IgG 抗體,

再與鏈霉親和素-HRP 結合,形成免疫復合物,經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在

HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長

下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中鵝圓環病毒抗體(CV Ab)

的存在與否。


標本要求

1.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

操作步驟

1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1

2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先

加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不

觸及孔壁,輕輕晃動混勻,37℃溫育 45 分鐘。

3. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 4 次,拍干。

5. 加生物素標記的抗-IgG 抗體:每孔加入生物素標記的抗-IgG 抗體 50μl。37℃溫育 30 分

6. 洗滌:操作同 4。

7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入 50μl 的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育 30

分鐘。

8. 洗滌:操作同 4。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A 50μl,再加入顯色劑 B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11. 測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

結果判定:

試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為圓環病毒抗體(CV Ab)陰性

陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為圓環病毒抗體(CV Ab)陽性

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未

用完,板條應裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須

注意安全。

規格:

96 人份/盒

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6 個月

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